近年来，各类生物制剂和创新药蓬勃，医药行业进入上升期。药品的安全性和有效性一直是行业专家及患者关注的焦点。如何保障药品安全性和有效性高度达标的药品是医药行业的核心和公关难点。基于此，加强药物研发项目的质量管理，完善药品检测技术方法是保证药品安全性和有效性的关键环节。
2020版《药典》(以下简称《药典》)四部收载了通用技术要求、药用辅料和药包材标准。其中，技术要求部分对药品检测方法对了详细说明。其中，分子排阻色谱法作为药品分析方法的重要方法，其灵敏度、专属性、准确性均较高。
分子排阻色谱法是根据待测组分的分子大小进行分离的一种液相色谱技术。分子排阻色谱法的分离原理为凝胶色谱柱的分子筛机制。色谱柱多以亲水硅胶、凝胶或经过修饰的凝胶如葡聚糖凝胶和琼脂糖凝胶等为填充剂。填充剂表面分布着不同孔径尺寸的孔，药物分子进入色谱柱后，它们中的不同组分按其分子大小进入相应的孔内，大于所有孔径的分子不能进入填充剂颗粒内部，在色谱过程中不被保留，最早被流动相洗脱至柱外，表现为保留时间较短；小于所有孔径的分子能自由进入填充剂表面的所有孔径，在色谱柱中滞留时间较长，表现为保留时间较长；其余分子则按分子大小依次被洗脱。
《药典》分子排阻色谱法部分还包括对仪器的一般要求以及该种方法检测的相关流程事项。
对仪器的一般要求：
在药物分析中，尤其是分子量或分子量分布测定中，通常采用高效分子排阻色谱法。分子排阻色谱法所需的进样器和检测器同高效液相色谱法(《药典》通则 0512)，液相色谱泵一般分常压、中压和高压泵。
该种方法选用与供试品分子大小相适应的色谱柱填充剂。使用的流动相通常为水溶液或缓冲溶液，溶液的 pH 值不宜超出填充剂的耐受力，一般 pH 值在 2~8 范围。流动相中可加入适量的有机溶剂，但不宜过浓，一般不应超过 30%，流速不宜过快，一般为0.5~1.0ml/min。
检测流程及方法提要：
1.系统适用性试验：分子排阻色谱法的系统适用性试验中色谱柱的理论板数(n)、分离度、重复性、拖尾因子的测定方法。
在一般情况下，同高效液相色谱法(《药典》通则 0512)项下方法，但在高分子杂质检查时，某些药物分子的单体与其二聚体不能达到基线分离时，其分离度的计算公式为：
2测定法：主要包括分子量测定法、生物大分子聚合物分子量与分子量分布的测定法、高分子杂质测定法。
(1)子量测定法一般适用于蛋白质和多肽的分子量测定。按各品种项下规定的方法，选用与供试品分子大小相适宜的色谱柱和适宜分子量范围的标准物质。
(2)生物大分子聚合物分子量与分子量分布方法测定时，选用与供试品分子结构与性质相同或相似的标准物质十分重要。此外，由于生物大分子聚合物如多糖、多聚核苷酸和胶原蛋白等具有分子大小不均一的特点，故生物大分子聚合物分子量与分子量分布是控制该类产品的关键指标。
(3)高分子杂质测定法主要用于检测高分子聚合物或高分子物质，并按各品种项下规定的色谱条件进行分离。由于高分子杂质系指供试品中含有分子量大于药物分子的杂质，该种物质通常是在药物生产或贮存过程中产生的高分子聚合物或在生产过程中未除尽的可能产生过敏反应的高分子物质。
3.定量方法：主要包括主成分自身对照法 、面积归一化法、限量法、自身对照外标法四种。成分自身对照法 、面积归一化法均同高效液相色谱法(《药典》通则 0512)项下规定。
其中，成分自身对照法一般用于高分子杂质含量较低的品种。限量法一般用于混合物中高分子物质的控制。值得注意的是，限量法除另有规定外，不得检岀保留时间小于标准物质保留时间的组分。自身对照外标法一般用于 Sephadex G-10 凝胶色谱系统中 β-内酰胺抗生素中高分子杂质的检查。
